Blandad syra-fermentering
Allmänt
En del bakterier kan fermentera (jäsa) glukos till en blandning av följande organiska syror: myrsyra, ättiksyra och mjölksyra. Detta kallas blandad syra-jäsning och orsakar kraftigt sänkt pH i mediet. Därför kan blandad syrajäsning påvisas genom tillsats av indikatorn metylrött (MR). Testet kallas ibland för MR-test.Metodik
- Slamma upp en bakteriekoloni från en renkultur i MR/VP-buljong.
- Inkubera vid 30-37ºC under 24-48 tim.
- Tillsätt 2-3 droppar av en metylrött-lösning.
- Positivt
testresultat: rött färgomslag
- Negativt
testresultat: inget färgomslag.
Metylrött-test, där det högra röret visar en positiv reaktion. (Bild: SLU/SVA.)
Användning
Medlemmar av familjen Enterobacteriaceae har blandad syrajäsning.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-06-23.
Citrat-test
Allmänt
En del bakterier kan utnyttja citrat som enda kolkälla och citrattestet visar om bakterien ifråga kan göra det.Metodik
- Inokulera ett citrat-buljongrör med en liten mängd
bakterier eller stryk ut (alternativt: stickinokuler) på
(alternativt: i) "Simmons citratrör.
- Inkubera vid 30-37ºC under 24-48 tim.
- Positivt testresultat: växt i citrat-buljong eller växt med blått färgomslag i Simmons citratrör.
- Negativt
testresultat: ingen växt i citrat-buljong eller växt
men utan färgomslag (d.v.s. fortfarande grön färg) i
Simmons citratrör.
Användning
Citrat-testet används bl.a. för att skilja Citrobacter freundii från Escherichia coli.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-06-23.
Divätesulfid-produktion
Allmänt
En del bakterier kan metabolisera vissa svavelföreningar under bildning av divätesulfid (H2S, äldre namn: svavelväte). Divätesulfid är en giftig och illaluktande gas (luktar ruttna ägg). Om man använder lättlösliga järn- eller blysalter (t.ex. järncitrat) i ett s.k. H2S-medium, som också innehåller natriumtiosulfat (Na2S2O3), kan dessa reagera med eventuell H2S under bildning av svart olöslig järn- resp. blysulfid.Metodik
- Stickinokulera H2S-mediet med bakterier från en koloni.
- Inkubera vid 30-37ºC under 24-48 tim.
- Positivt testresultat: svärtning av mediet.
- Negativt
testresultat: oförändrat medium.
Användning
Kan bl.a. användas för differentiering av vissa Campylobacter-arter.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-06-23.
DNas-test
Allmänt
Många bakterier har enzymer, som bryter ner nukleinsyra för att bakterien ska kunna använda de ingående nukleotiderna till att bygga upp den egna nukleinsyran. DNas är ett sådant enzym som alltså bryter ner DNA. Förekomst av DNas är karakteristiskt för vissa arter eller stammar av bakterier och används alltså för typning.
Metodik
Man kan testa om bakterien har DNas genom att odla dem på en agarplatta, som innehåller DNA. Om bakterien har DNas och om man låter bakterierna växa över natten så kommer DNA att brytas ner och om man då häller utspädd saltsyra (HCl) på plattan, så får man en klar zon närmast kolonierna eller stryket och en utfällning på resten av plattan. Detta beror på att de enskilda nukleotiderna är lösliga i utspädd HCl, medan DNA faller ut.
DNas-test på Staphylococcus spp. Stammen i det övre stryket är negativ (ingen uppklarning runt stryket), medan stammen i det nedre stryket är positiv. (Bild: SLU/SVA)
Användning
Testet är användbart för att skilja:- Serratia spp. från Enterobacter spp.
- Staphylococcus aureus (de flesta stammar är koagulaspositiva) från koagulasnegativa Staphylococcus spp.
- Moraxella catarrhalis från Neisseria spp.
Hippurat-test
Allmänt
Vissa bakterier kan hydrolysera hippurat till aminosyran glycin och benzoesyra med hjälp av enzymet hippurikas. Bildning av glycin kan påvisas med hjälp av ninhydrin, som reagerar med fria aminogrupper (-NH2) och det bildas en blåfärgad produkt.Metodik
- Slamma upp en plast- eller platinaögla med bakterier (t.ex. Campylobacter sp.) i 0,5 ml
natriumhippuratlösning.
- Inkubera suspensionen vid 37ºC under 2 tim i vattenbad.
- Tillsätt därefter försiktigt 0,2 ml ninhydrinlösning utan omblandning.
- Inkubera röret under ytterligare 10 min vid 37ºC
före avläsning.
- Positivt testresultat: Djupt mörkblå färg.
- Negativt testresultat: Blekblå färg.
Användning
Hippurat-testet används framför allt för att skilja Campylobacter jejuni (hip+)
från Campylobacter coli
(hip-). Används ockå i kombiunation med andra tester
för att typa Brachyspira
sp.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-06-23.
Indol-test
Allmänt
Bakterier som har enzymet tryptofanas kan hydrolyserar aminosyran tryptofan till indol, pyrodruvsyra och ammoniak. Närvaro av indol kan påvisas med hjälp av Kovács reagens i det s.k. indol-testet. Kovács reagens innehåller p-dimetylamino-benzylaldehyd, som bildar ett rödfärgat komplex med indol.Metodik
- Slamma upp en koloni från en renkultur av den bakterie, som ska undersökas, i lämplig buljong (t.ex. LTLSB- eller tryptofanbuljong).
- Inkubera buljongen vid 44ºC i 20-28 tim.
- Tillsätt några droppar av Kovács reagens.
- Positivt testresultat: Indolreagenset får cerisröd färg.
- Negativt testresultat: Indolreagenset förblir svagt gult.
Indol-test, där det högra röret visar ett positivt resultat. (Bild: SLU/SVA.)
Användning
Konfirmering av misstänkta E.
coli-stammar. Typning (artbestämning) Brachyspira-arter i kombination med
andra tester.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-05-27.
Katalas-test
Allmän information
Många aeroba bakterier och de flesta som är fakultativt
anaeroba producerar
enzymet katalas, som ingår i bakteriernas enzymsystem för
avgiftning av H2O2 (väteperoxid). H2O2
bildas
från superoxidradikalen med hjälp av enzymet
superoxiddismutas.
Många syretolernta bakterier har peroxidas (som inte är
samma enzym som cytokrom c oxidas) i stället
för katalas. Obligata anaerober saknar både
superoxiddismutas och katalas.Katalas innehåller en hemgrupp vid den aktiva ytan och följande reaktion katalyseras med ett mycket högt omsättningstal (turnover number):
2 H2O2 → 2 H2O + O2
Metodik
- Sprid bakterier på en agarplatta och inkubera den över
natten (18-24 tim) vid lämpliga betingelser.
- Samla upp bakterier från en koloni, med en plast- eller platinögla och applicera dem på ett objektglas.
- Om bakterierna tas från en blodplatta måste man undvika att få med agar, eftersom hemoglobinet också innehåller hemgrupper, som kan ge upphov till en falskt positv reaktion.
- Tillsätt en droppe 3% H2O2 till bakteriematerialet och iaktag bakteriesuspensionen. Var försiktig med H2O2 som är frätande !!!
- Positivt testresultat: Gasbildning (O2) i form av bubblor visar att bakterien har katalas.
- Negativt testresultat: Ingen gasbildning.
Användning
Katalastestet används för att skilja Staphylococcus
spp. och Micrococcus spp.,
som är katalaspositiva från Streptococcus spp. respektive Enterococcus spp. som är
katalasnegativa.
Uppdaterad: 2009-07-14.
Koagulas-test
Allmänt
Vissa bakterier producerar koagulas, som är ett enzym, som kan ovandla fibrinogen till fibrin, d.v.s. koagulera plasma. Förmågan att producera koagulas anses bl.a. vara kopplat till stafylokockers virulens. Testet används alltså får att skilja på koagulas-positiva och koagulas-negativa stafylokocker.Metodik
- Slamma upp en bakteriekoloni från den misstänkta renkulturen i 0,5 ml plasma från häst, kanin eller människa.
- Inkubera vid 37ºC.
- Avläs efter 4 timmar. Vid negativ reaktion (se nedan) fortsätt inkuberingen.
- Slutavläs efter totalt ett dygn.
- Positiv reaktion om plasman koagulerar och koaglet är stabilt, d.v.s. löses inte upp igen efter omskakning.
- Negativ reaktion om plasmen inte koagulerar eller koaglet löses upp efter omskakning.
Koagulas-test av Stahylococcus spp. Det övre röret visar ett positivt resultat (plasman har koagulerat) och det undre ett negativt.
Användning
Används för att skilja Staphylococcus aureus från koagulasnegativa Staphylococcus spp. Observera dock att vissa stammar av S. aureus kan vara koagulasnegativa, men det är ovanligt. Vissa stammar av S. hyicus och S. intermedius kan vara koagulaspositva. S. pseudointermedius är koagulaspositiv, men först efter 24 tim.
Ovanstående information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-10-24.
Lecithinas-test
Allmänt
Många bakterier har enzymer som kan bryta ner lipider, s.k. lipaser. Lecithinas, som även kallas fosfolipas C, är ett sådant enzym som spjälkar fosfolipiden lecithin (= fosfatidylkolin). Fosfolipider, som är laddade är vanligen lösliga i vatten, men en av produkterna som bildas vid spjälkningen, nämligen diglycerid, är oladdad och har två kolvätekedjor. Den är därför olöslig i vatten och detta utnyttjas i lecithinas-testet då man odlar bakterierna på äggule-agar. Äggula innehåller mycket lecithin.Metodik
- Stryk ut bakterierna i form av ett streck på äggule-agar.
- Läs av plattan efter 24 tim.
- Positivt testresultat: Utfällning runt utstryket av bakterier.
- Negativt testresultat: Ingen utfällning.
Bacillus cereus på äggule-agar. Notera utfällningen runt bakteriestryket, som visar att den är positiv.
Användning
Kan bl.a. användas för att skilja på vissa arter
inom genus Bacillus.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-10-24.
Oxidas-test
Allmän information
Bakterier, som har aerob cellandning, har ofta cytokrom c och ett
cytokrom c oxidas, vilket i kombination med andra metoder kan
användas
vid typning. Man
använder ofta ett kommersiellt test, vilket innehåller en
artificiell elektronacceptor (N, N, N', N'-tetrametyl-p-fenylendiamin,
se Fig. 1),
som ändrar färg beroende
på redoxtillstånd. Substansen är en s.k.
redoxindikator och den kan alltså oxideras av den oxiderade
formen av
cytokrom c. Cytokrom c oxidas är det sista enzymet i
andningskedjan,
där det normalt reducerar syre till vatten och pumpar ut protoner
enligt följande nettoreaktion:4 Fe2+-cytochrome cred + 8H+in + O2 → 4 Fe3+-cytochrome cox + 2H2O + 4H+out
Cytokrom c oxidas är ett transmembranproteinkomplex (Komplex IV), som också finns i mitokondriernas plasma- (inner-) membran.
Metodik
- Håll plastampullen (som innehåller en glasampull) rättvänd med tippen vänd ifrån dig och krossa glasampullen, som ligger inuti plastampullen, mellan tummen och pekfingret.
- Applicera ett par droppar av oxidasreagenset på ett filtrerpapper.
- Överför bakterier från en koloni med hjälp av en plast- eller platinaögla till fläcken med reagenset på filtrerpappret. Kolonikulturen ska ha inkuberats vid lämplig temperatur under 18-24.
- Positivt testresultat: Mörkt blålila färgomslag inom 10-30 sek.
- Negativt testresultat: Inget färgomslag eller färgomslag efter mer än 30 sek.
Användning
Oxidas-testet används ofta för identifiering av gram-negativa bakterier. T.ex. för att identifiera medlemmar av familjen Enterobacteriaceae, som är oxidas-negativa, utom genus Plesiomonas (ox+). Medlemmar av familjen Pseudomonadaceae, samt genus Aeromonas och Campylobacter är oxidas-positiva.Uppdaterad: 2009-07-14.
Ureas-test
Allmänt
Vissa bakterier har enzymet ureas, som i närvaro av H2O bryter ner urea (=urinämne eller karbamid) till NH3 (ammoniak) och CO2 (koldioxid).
Metodik
Man kan testa om bakterien har ureas genom att odla dem i ureas-buljong, som innehåller en indikator och alltså visar om pH förändras i mediet. Om bakterien har ureas bildas ammoniumkarbonat och buljongen blir basisk d.v.s. färgen slår om till röd (cerise) färg.
Ureas-buljong:
| Substans |
Mängd (g) |
|---|---|
| Pepton |
1,0 |
| Glukos |
1,0 |
| Natriumklorid |
5,0 |
| Dinatriumfosfat |
1,2 |
| Kaliumdivätefosfat |
0,8 |
| Fenolrött |
0,004 |
Ovanstående information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-05-14.
Voges-Proskauer- (VP-) test
Allmänt
VP-testet visar om bakterien har butandiol-fermentation och kan spjälka glykos till acetoin via pyruvat och därefter till 2,3-butandiol. Om KOH (kaliumhydroxid) tillsättes, så omvandlas acetoin till diacetyl, som reagerar med alfa-naftol och bildar ett rosa komplex.Metodik
- Slamma upp en bakteriekoloni från den renkultur, som ska
undersökas, i VP/MR-buljong.
- Inkubera vid 30-37ºC under 24-48 tim.
- Tillsätt 0,2 ml 40% KOH och därefter 0,6 ml
alfa-naftollösning.
- Positivt testresultat: rosa färgomslag.
- Negativt
testresultat: inget färgomslag.
Voges-Proskauer-test, där det högra röret visar ett positivt testresultat. (Bild: SLU/SVA.)
Användning
Klebsiella spp. och Enterobacter spp. har
butandiolfermentation till skillnad från Escherichia coli, Salmonella spp. och Shigella spp.
Ovanstående
information kommer att kompletteras.
Uppdaterad: 2008-06-23.